希凱生物是Anatrace授權(quán)代理商,提供膜蛋白研究試劑:磷脂、去垢劑,生化試劑等
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膜蛋白是生物膜功能的主要執(zhí)行者,在生物體內(nèi)參與許多重要的生理過程。由于很難獲得穩(wěn)定均勻且維持膜蛋白正確構(gòu)象的膜模擬環(huán)境,膜蛋白研究遠遠滯后于水溶性蛋白。磷脂納米盤(Nanodisc)是由高密度脂蛋白發(fā)展而來的用于膜蛋白研究的新類型膜結(jié)構(gòu)。將膜蛋白與Nanodisc組裝起來,是膜蛋白研究的有效方法。制備納米盤的一種常用方法是將苯乙烯-馬來酸(SMA)添加到完整的細胞膜上,從而自發(fā)地生成SMA-脂質(zhì)顆粒(SMALP)的納米盤。
Anatrace提供新一代 苯乙烯-馬來酸酐共聚物(SMA)系列衍生物產(chǎn)品。
SMA-EA,Styrene Maleic Acid – Ethanol Amine copolymer, sodium salt
SMA - ED,SMA derivatized with ethylenediamine
SMAd-A,Styrene Maleimide-Amine copolymer, Dehydrated SMA Ethylenediamine copolymer
SMA-QA,Styrene Maleimide Quaternary Ammonium copolymer
對高濃度的二價陽離子(200 mM Ca2+ 或Mg2+)表現(xiàn)出更高的穩(wěn)定性,可通過改變脂質(zhì)與聚合物的比例,允許使用各種尺寸的 Lipid Nanodiscs 。 這些產(chǎn)品已被證明可以與合成脂質(zhì)形成 Nanodiscs [1],并直接從膜中溶解膜蛋白[2]。洗滌劑經(jīng)常干擾蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能,并可能導致變性,因此這些新聚合物是去垢劑的絕佳替代品。其溶解方案簡單明了(Figure 1)。
膜蛋白溶解方案
為了溶解來自天然脂雙層的膜蛋白,可以將聚合物直接添加到已在緩沖液中重懸至最終濃度為 1% – 3% 的分離膜制劑中。聚 合物可以作為SMA的粉末或原液加入到緩沖液中(新SMA聚合物的pH穩(wěn)定性見圖2;每種情況下的最佳pH值可能略有不同)。
溶解在室溫或 4°C 下進行,同時輕輕搖動溶液。
溶解在 SMA 聚合物中的膜蛋白與所有常用的蛋白質(zhì)純化技術(shù)兼容,包括 IMAC、親和、離子交換和 SEC。
在 SMA 中溶解和純化的膜蛋白與大多數(shù)生物物理表征分析兼容,包括 SEC、SDS-PAGE、DLS、TEM 和 NMR 光譜。
制備 DMPC Nanodiscs方案
使用 DMPC (10 mg/ml) 在 pH 7.4 的 50 mM 磷酸鉀中作為儲備溶液制備具有不同聚合物的Nanodiscs。 聚合物原液在緩沖液中制備為10mg /ml (pH值的選擇,見圖2)。
通過添加 2:1 w/w SMA-EA (10 mg/ml) 和 DMPC (10 mg/ml) 制備 SMA-EA Nanodiscs,然后在 37°C 下孵育 4 小時。
通過添加 1.5:1 w/w SMA-QA (10 mg/ml) 和 DMPC (10 mg/ml) 制備 SMA-QA Nanodiscs,然后在 37°C 下孵育 4 小時。
可以使用體積排阻色譜法純化Nanodiscs,并且可以使用動態(tài)光散射評估它們的尺寸。
我們建議在 50 mM 磷酸鉀緩沖液 (pH 7.4) 中使用Nanodiscs溶液 (100:1 DMPC:protein) 將目標蛋白孵育 12 小時。